Для обнаружения и исследования микроорганизмов применяют микроскопы. Световые микроскопы предназначены для изучения микроорганизмов, которые имеют размеры не менее 0,2 мкм (бактерии, простейшие и т. п.), электронные для изучения более мелких микроорганизмов (вирусы) и мельчайших структур бактерий.

Микроскоп состоит из оптической и механической частей.

Механическая часть представлена:

·        штатив – состоит из держателя тубуса и массивной ножки, которая служит опорой микроскопа;

·        тубус – в нем размещена оптическая система, перемещается при помощи двух винтов, в нижней части имеется револьверное устройство с отверстиями для объективов, в верхнем отверстии – окуляр;

·        предметный столик – укреплен на штативе, может быть подвижным.

Оптическая часть представлена:

·        зеркало отражает падающий на него свет и направляет его в конденсор для освещения препарата. Одна сторона – плоская, ее используют при любом источнике света и любом увеличении; другая – вогнутая, ее используют для работы без конденсора при малом увеличении;

·        конденсор состоит из нескольких линз, собирающих отраженный зеркалом пучок света и направляющих его на плоскость препарата. В нижней части конденсора – ирисовая диафрагма, посредством которой можно менять угол лучей и количество пропускаемого света;

·        объектив – система линз, строящих действительное, увеличенное и перевернутое изображение объекта. Наружная (передняя) линза называется фронтальной. Даваемое ею изображение обладает рядом аберраций, свойственных простой линзе. Эти недостатки устраняются вышележащими коррекционными линзами. Каждый объектив характеризуется свойственным ему собственным увеличением, фокусным расстоянием. Объективы могут быть сухие и иммерсионные. Сухие дают слабое увеличение из-за большого фокусного расстояния между фронтальной линзой и препаратом. При иммерсионном микроскопировании на препарат наносят каплю иммерсионного масла (его показатель преломления близок к таковому стекла), при этом не происходит рассеивания луча света, а значит, хорошо освещается поле зрения.

·        окуляр – это увеличивающая оптическая система, через которую рассматривается действительное изображение объекта, которое дает объектив. Окуляр состоит из двух линз: собирающей, обращенной к объективу, и глазной, обращенной к глазу. Между ними находится диафрагма, которая задерживает боковые лучи и пропускает лучи, близкие к оптической оси и дающие более контрастное изображение. Окуляр еще раз увеличивает изображение объекта, но не раскрывает новых деталей его строения. Микроскопы бывают монокулярные (дают плоское изображение) и бинокулярные (дают объемное, стереоскопическое изображение).

Оптическая мощность микроскопа включает в себя возможное увеличение, разрешающую силу и способность точного воспроизведения , зависящую от устранения аберраций.

Общее увеличение микроскопа – это произведение увеличений объектива и окуляра.

Разрешающая способность микроскопа – это наименьшее расстояние между двумя точками объекта, которые воспринимаются глазом раздельно и не сливаются в одну: чем меньше размер частицы, видимой в микроскоп, тем  больше его разрешающая способность. Разрешающая способность объектива зависит от длины волны света и числовой апертуры объективов и конденсора.

В зависимости от среды, которая находится между объективом и препаратом, различают «сухие» объективы малого и среднего увеличения (до 40 х) и иммерсионные с максимальной апертурой и увеличением (90—100 х). «Сухой» объектив - это такой объектив, между фронтальной линзой которого и препаратом, находится воздух.

Особенностью иммерсионных объективов является то, что между фронтальной линзой такого объектива и препаратом помещают иммерсионную жидкость, имеющую показатель преломления такой же, как стекло (или близкий к нему), что обеспечивает увеличение числовой апертуры и разрешающей способности объектива. В качестве иммерсионной жидкости для объективов водной иммерсии используют дистиллированную воду, а для объективов масляной иммерсии — кедровое масло или специальное синтетическое иммерсионное масло. Использование синтетического иммерсионного масла предпочтительнее, поскольку его параметры более точно нормируются, и оно в отличие от кедрового, не засыхает на поверхности фронтальной линзы объектива.

 

Правила работы с иммерсионной системой:

1.    установить микроскоп на малое увеличение;

2.    навести максимальную освещенность (зеркало, конденсор, диафрагма);

3.    установить препарат на столик;

4.    нанести каплю масла на препарат;

5.    установить иммерсионный объектив;

6.    опустить объектив в каплю масла при помощи макровинта;

7.    наблюдая в окуляр вращать макровинт до появления изображения;

8.    микровинтом установить более четкое изображение;

9.    провести микроскопию мазка с описанием морфологических свойств;

10.                      поднять тубус вверх, снять препарат и очистить объектив от масла;

11.                      установить  микроскоп в нейтральное положение (малое увеличение, тубус вниз).

Существует несколько модификаций светового микроскопа, а, следовательно, и несколько видов световой микроскопии. Большинство бактериальных объектов прозрачны в видимом свете. Окрашенные препараты не позволяют определить некоторые морфологические свойства таких объектов. Для исследования живых нефиксированных и неокрашенных объектов применяют устройства:

·        Фазово-контрастное устройство обеспечивает четкое изображение объектов. В основе метода лежит изменение фазы световых лучей при прохождении их через прозрачные объекты. Человеческий глаз выявляет только различия в длине (цвет) и амплитуде (интенсивность) световой волны, но не позволяет выявить различия в фазе. С помощью устройства различия в фазе превращаются в изменение амплитуды. Устройство представляет собой прозрачный диск, на поверхности которого напылено кольцо из металла  (фазовое кольцо), расположенный в задней плоскости объектива; и кольцевую диафрагму (светонепроницаемая пластина с прозрачным кольцевидным участком), помещенная под конденсором.

Темнопольный конденсор  отличается от обычного тем, что пропускает только косые краевые лучи источника света, которые ввиду сильного наклона не попадают в объектив, в результате поле зрения микроскопа остается темным. На объект попадают только боковые лучи, отраженные от  внутренних зеркальных поверхностей конденсора. Эти лучи отражаются в линзу объектива и позволяют видеть светлое изображение на темном фоне.
Last modified: Tuesday, 20 March 2018, 2:30 PM